項(xiàng)目背景

重組腺相關(guān)病毒 (RecombinantAdeno-associatedVirus，rAAV) 是在野生型AAV基礎(chǔ)上改造而成的基因載體。通過刪除野生型AAV的rep和cap基因，僅保留反向末端重復(fù)序列 (ITRs) ，并在其中插入治療性基因表達(dá)盒改造而成。

復(fù)制型腺相關(guān)病毒 (ReplicationCompetentAAV，rcAAV) 是在rAAV載體生產(chǎn)過程中，因rep/cap基因與ITR發(fā)生非同源重組，形成了具有復(fù)制能力的AAV，即復(fù)制型腺相關(guān)病毒。rcAAV雖然粒與目前已知的人類疾病無直接關(guān)聯(lián)，但作為一種污染物，會(huì)增強(qiáng)或干擾治療用rAAV 的作用效果或者導(dǎo)致rAAV載體基因序列的漂移 ，影響其基因組穩(wěn)定性以及體內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)效率等。因此，規(guī)?；a(chǎn)過程中監(jiān)測和產(chǎn)品放行時(shí)檢測rcAAV十分重要。

法規(guī)要求

國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)中心(CDE)發(fā)布的《體內(nèi)基因治療產(chǎn)品藥學(xué)研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》中強(qiáng)調(diào)基于質(zhì)量研究和關(guān)鍵質(zhì)量屬性的鑒別建立完善的質(zhì)量控制策略。病毒載體制備工藝中，針對(duì)出現(xiàn)可復(fù)制型病毒的潛在風(fēng)險(xiǎn)建立控制策略，如，對(duì)生產(chǎn)過程中適當(dāng)階段的樣品或終產(chǎn)品進(jìn)行可復(fù)制型病毒的檢測等。

在《基因治療產(chǎn)品非臨床研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則》中提到，采用復(fù)制缺陷病毒載體的基因治療產(chǎn)品，需要評(píng)估在生產(chǎn)的過程中是否有可能產(chǎn)生復(fù)制型病毒。

產(chǎn)品特點(diǎn)

與HEK293、Sf9、Hi5、CHO、大腸桿菌、畢赤酵母、Vero等常用細(xì)胞系無交叉反應(yīng)。與金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、分枝桿菌等無交叉反應(yīng)。

1. 單管PCR試劑，方便取用，無需使用時(shí)配劑；

采用UDG酶防污染系統(tǒng)，有效避免擴(kuò)增產(chǎn)物污染風(fēng)險(xiǎn)。

引入內(nèi)部質(zhì)控(內(nèi)標(biāo)) ，監(jiān)控提取擴(kuò)增全流程，提高檢測質(zhì)量。

校準(zhǔn)品溯源到數(shù)字PCR，量值準(zhǔn)確。

試劑盒反復(fù)凍融3次、5次、7次、10次，試劑性能不受影響。

在ABI7500、ABlQuantStudio?5、Bio-RadCFX96、SLAN-96P、SLAN-96S、羅氏Lightcycler480Ⅱ等不同型號(hào)設(shè)備上性能均不受影響。

參考文獻(xiàn)：

1.《體內(nèi)基因治療產(chǎn)品藥學(xué)研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》

2.《基因治療產(chǎn)品非臨床研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則》