前 言
抗體在生物醫(yī)學(xué)研究、臨床診斷和生物制藥中扮演著重要角色。相較于特異性極高的單克隆抗體,多克隆抗體能夠識(shí)別同一抗原的多個(gè)表位,在檢測(cè)低豐度抗原、抗原突變適應(yīng)性和宿主細(xì)胞蛋白(Host cell protein,HCP)檢測(cè)等方面具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì),因此在某些應(yīng)用場(chǎng)景中更具價(jià)值。
近年來(lái),HCP多抗在生物制藥質(zhì)量控制中受到越來(lái)越多的關(guān)注。今天,我們就來(lái)深入了解多克隆抗體,并重點(diǎn)探討HCP多抗的制備和應(yīng)用。
抗體結(jié)構(gòu)與類別
1. 抗體結(jié)構(gòu)
抗體以一個(gè)或多個(gè)近似“Y”字形單體存在,每個(gè)Y字形由4條多肽鏈組成,包含兩條分子量較大的重鏈和兩條分子量較小的輕鏈。輕鏈和重鏈通過(guò)二硫鍵連接形成。每條重鏈包含3-4個(gè)恒定區(qū)(CH)和一個(gè)可變區(qū)(VH),輕鏈包含一個(gè)恒定區(qū)(CL)和一個(gè)可變區(qū)(VL)??贵w的Y形臂區(qū)被稱為抗原結(jié)合區(qū)(Fab區(qū))。Y形結(jié)構(gòu)基座的作用是調(diào)節(jié)免疫活動(dòng),該區(qū)域被稱為可結(jié)晶區(qū)(Fc區(qū))。
2. 抗體類別
在大多數(shù)哺乳動(dòng)物,抗體根據(jù)重鏈的不同,一共分為五種,分別用希臘字母α、δ、ε、γ和 μ 來(lái)命名,相對(duì)應(yīng)組成的抗體就稱為 IgA、IgD、IgE、IgG 和 IgM 五種抗體。
什么是多克隆抗體?
多克隆抗體(Polyclonal Antibody, pAb)是由多個(gè)B細(xì)胞克隆分泌的一組抗體混合物,能夠識(shí)別并結(jié)合同一抗原上的不同表位。相比于僅針對(duì)單一表位的單克隆抗體 (mAb),多克隆抗體的優(yōu)勢(shì)在于:
1. 廣譜識(shí)別:即使目標(biāo)蛋白發(fā)生輕微突變或結(jié)構(gòu)改變,多克隆抗體仍可與其結(jié)合,保證檢測(cè)的靈敏度和穩(wěn)定性。
2. 高靈敏度:由于同時(shí)識(shí)別多個(gè)表位,多克隆抗體在免疫檢測(cè)中信號(hào)更強(qiáng)。
3. 快速制備:生產(chǎn)周期短,相比單克隆抗體更容易獲得。
4. 適應(yīng)性強(qiáng):適用于高異質(zhì)性抗原,特別是在抗體檢測(cè)、免疫檢測(cè)及質(zhì)量控制領(lǐng)域。
多克隆抗體的制備流程
多克隆抗體的制備流程通常包括以下幾個(gè)步驟:
1. 抗原制備:選擇合適的抗原(純化蛋白、多肽等),并進(jìn)行質(zhì)量?jī)?yōu)化。
2. 免疫動(dòng)物:將抗原與佐劑(如弗氏佐劑)混合后注射到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(如兔子、小鼠、山羊等)體內(nèi)。
3. 血清采集:經(jīng)過(guò)多輪免疫后,檢測(cè)抗體效價(jià),當(dāng)?shù)味冗_(dá)到峰值時(shí)采集血液樣本并分離血清。
4. 抗體純化:采用蛋白A/G親和層析、硫酸銨沉淀等方法去除非特異性蛋白,提高抗體純度。
5. 質(zhì)量檢測(cè):通過(guò)ELISA、Western Blot等方法驗(yàn)證抗體效價(jià)和特異性,確保其適用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)或生產(chǎn)。
HCP多抗:生物制藥質(zhì)量控制的關(guān)鍵工具
1. 什么是HCP多抗
在生物藥物生產(chǎn)過(guò)程中,宿主細(xì)胞(如CHO細(xì)胞、大腸桿菌、Sf9細(xì)胞等)用于表達(dá)重組蛋白,但在純化過(guò)程中,宿主細(xì)胞蛋白(Host Cell Proteins, HCPs)可能以雜質(zhì)的形式殘留在最終產(chǎn)品中。這些殘留HCP可能影響藥物的安全性、免疫原性和穩(wěn)定性,因此需要嚴(yán)格控制。HCP檢測(cè)是生物制藥質(zhì)量控制中的核心環(huán)節(jié),而HCP多克隆抗體在這一過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。
2. HCP多抗的作用
HCP多抗的主要目標(biāo)是最大程度覆蓋并檢測(cè)生物藥生產(chǎn)過(guò)程中及最終產(chǎn)品中的宿主細(xì)胞殘留蛋白,為生物藥質(zhì)量控制和法規(guī)合規(guī)提供關(guān)鍵支持。HCP多抗的主要作用包括以下幾點(diǎn):
2.1 高覆蓋率識(shí)別宿主細(xì)胞蛋白:HCP多抗可以識(shí)別HCP的多個(gè)不同表位,從而實(shí)現(xiàn)更全面的HCP檢測(cè),避免因單個(gè)抗原表位丟失導(dǎo)致的漏檢問(wèn)題;針對(duì)不同宿主細(xì)胞(如CHO、大腸桿菌、Sf9細(xì)胞等),可通過(guò)優(yōu)化免疫策略,提高對(duì)特定宿主HCP的識(shí)別覆蓋率,使檢測(cè)更可靠。HCP組成可能隨細(xì)胞培養(yǎng)條件、表達(dá)系統(tǒng)的變化而發(fā)生差異,多抗能夠容忍一定程度的蛋白變化,提高檢測(cè)穩(wěn)定性。
2.2 關(guān)鍵質(zhì)量控制工具,支持生物制品申報(bào):全球主要藥品監(jiān)管機(jī)構(gòu)(如FDA、EMA、NMPA)均要求對(duì)HCP進(jìn)行嚴(yán)格檢測(cè),確保其殘留量符合安全標(biāo)準(zhǔn);HCP多抗的應(yīng)用可以幫助藥企在藥物開(kāi)發(fā)、臨床試驗(yàn)和上市申報(bào)階段滿足監(jiān)管要求。HCP多抗可用于不同生產(chǎn)階段(細(xì)胞培養(yǎng)液、純化中間體、最終產(chǎn)品)的檢測(cè),幫助優(yōu)化純化工藝,提高產(chǎn)品質(zhì)量;在生物藥大規(guī)模生產(chǎn)過(guò)程中,HCP多抗可用于監(jiān)測(cè)不同生產(chǎn)批次間的HCP水平,確保生產(chǎn)一致性,降低質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)。
2.3 促進(jìn)工藝優(yōu)化,提高藥物安全性:HCP多抗可用于篩選和優(yōu)化純化工藝,提高宿主蛋白的去除效率,確保最終產(chǎn)品符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);通過(guò)長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)HCP水平,評(píng)估HCP可能帶來(lái)的蛋白降解或免疫原性風(fēng)險(xiǎn),提升藥物長(zhǎng)期穩(wěn)定性;某些HCP可能會(huì)誘導(dǎo)免疫反應(yīng),影響藥物療效。HCP多抗可以輔助分析高風(fēng)險(xiǎn)HCP,提高產(chǎn)品安全性。
3. HCP多抗的研發(fā)與制備
3.1 HCP抗原制備:從目標(biāo)宿主細(xì)胞(CHO、大腸桿菌、Sf9等)中提取全蛋白,作為免疫抗原,通過(guò)超速離心、層析分離等方法分離不同蛋白,保留更多HCP成分,確保多抗能覆蓋盡可能多的宿主蛋白。
3.2 動(dòng)物免疫:選擇兔、羊等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,通過(guò)多次免疫,使動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生針對(duì)HCP的廣譜多克隆抗體。
3.3 血清采集與抗體純化:使用親和層析(如蛋白A/G)或免疫親和層析純化對(duì)多抗血清進(jìn)行純化,獲取HCP多抗。
3.4 抗體檢測(cè):通過(guò)ELISA、Western Blot等方法評(píng)估抗體親和力,并通過(guò)2D-DIGE或質(zhì)譜分析等方法對(duì)抗體覆蓋率進(jìn)行檢測(cè)。
多克隆抗體在科研和臨床診斷中扮演著不可或缺的角色,尤其是HCP多抗,已成為生物藥質(zhì)量控制的重要工具。未來(lái),隨著生物技術(shù)的發(fā)展,HCP多抗的制備與應(yīng)用將不斷優(yōu)化,為生物藥的安全性與有效性提供更強(qiáng)有力的保障。
目前,寶銳生物開(kāi)發(fā)了E.coli HCP殘留檢測(cè)試劑盒、CHO HCP殘留檢測(cè)試劑盒和HEK 293 HCP殘留檢測(cè)試劑盒等多款多抗相關(guān)產(chǎn)品,如果你對(duì)HCP多抗或其他抗體產(chǎn)品感興趣,歡迎聯(lián)系我們,獲取更多技術(shù)支持!
0756-8699969
地址:珠海市香洲區(qū)南屏科技工業(yè)園屏北一路333號(hào)
郵箱:marketing@biori.com
微信公眾號(hào) |
產(chǎn)品咨詢 |
加入我們 |
視頻號(hào) |